فلوسایتومتری 5
اهداف:
- آشنایی با نحوه کار و عملکرد تکنیک فلوسایتومتری
- آشنایی با قسمت های مختلف دستگاه فلوسایتومتری
- آشنایی با مفاهیم موجود در دستگاه فلوسایتومتری
به طور خلاصه آنچه تا کنون در مورد فلوسایتومتری ذکر شده است را با هم مرور می کنیم. سوسپانسیون سلولی در منطقه تمرکز هیدرودینامیک به صورت سلول های منفرد در جریان مایع درآمده و از مقابل منبع نور لیزر عبور می کنند. پرتوهای لیزر بر روی سلول ها( متصل به رنگ فلورسنس ) متمركز و به آنها برخورد می نمایند و پراکنده می شوند. پراکندگی ها در جهت جلو (FSC)، جانبی (SSC) ثبت می شوند. پرتوهای پراکنده شده پیش از رسیدن به آشکارسازها از طریق فیلترها و آیینه ها در جهت صحیح هدایت و توسط تقویت کننده ها، تقویت شده و سپس به آشکار ساز می رسند.
به هنگام آماده سازی سلول ها و اتصال رنگ های گوناگون فلورسنس به سلول، پرتوهای تابیده شده پس از برخورد تغییر طول موج داده و در زوایای 10 تا 90 درجه پراکنده می شوند كه آن را به عنوان پراکندگی های فلورسنس (Fluorescence Scatter) می شناسند. طول موج بازتابی در این نوع پراكنش با توجه به رنگ فلورسنس به کار رفته متغیر است. سپس طیف های نوری ایجاد شده توسط فیلترها و آیینه ها به سمت آشکار سازها (Detector ) هدایت شده و سیگنال های ایجاد شده را ثبت می کنند.
این فیلتر ها یا آشکارسازها که طول موج های مختلف فلورسنس را دریافت می كنند با توجه به تعدادشان شماره گذاری می شوند كه معمولاً در بیشتر دستگاه های فلوسیتومتری پرتوهایی با طول موج 520 تا 570 (محدوده سبز= FL1 )، پرتوهایی با طول موج 585-620 (محدوده نارنجی= FL2) و پرتوهایی با طول موج 625-760 (محدوده قرمز= FL3) را شامل می شوند.
مانند شکل زیر:
اما طراحی این فیلترها در دستگاه های مختلف متفاوت است. در شکل زیر می توانید ملاحظه نمایید که می توان ترتیب این فیلتر ها تغییر داد و حتی به آنها اضافه یا کم نمود.
نورهای تابشی پس از برخورد با فیلتر 735LP (انهایی که بالتر از 735 نانومتر اند) به آشکار ساز 780/60 می رسند. این آشکار ساز طول موج های نشری را که بین 750 تا 810 باشند را می تواند برای ما نشان دهد. حال اگر طول موج برخورد کننده با فیلتر 735LP کوچکتر از این فیلتر باشد به فیلتر 655LP برخورد کرده و بزرگتر از آن در آشکار ساز 670LP ثبت شده و کوچکتر از آن به فیلتر 610 منعکس می شود و الی آخر.
در داخل آشکارسازها پرتوها توسط گروهی از تقویت کننده ها، تقویت شده تا بتوانند به یک ولتاژ ساده الکتریکی مبدل شوند و سپس در قسمت الکترونیک به داده های دیجیتالی تبدیل شده و در انتها، توسط نرم افزارهای مخصوص قابل تجزیه و تحلیل می شوند. البته شایان ذکر است که برخی از پرتوها نیاز به تقویت کننده های قوی ندارند اما برخی نیاز به تقویت شدن مفصل دارند.
مرکز یادگیری سایت تبیان - تهیه: فاضل صحرانشین سامانی
تنظیم: مریم فروزان کیا
