تبیان، دستیار زندگی
در تکنیک های وسترن بلات، RCR،Real time همان طور که ذکر شد،نیازمند دسترسی به کل محتوای ژنتیکی سلول و یا محتوای پروتئینی هستیم. بنابراین باید غشای سلول تخریب شود و در نتیجه ما خود سلول را دیگر نخواهیم داشت. ...
عکس نویسنده
عکس نویسنده
بازدید :
زمان تقریبی مطالعه :

فلوسایتومتری 1

اهداف:

  • آشنایی با دیگر تکنیک های تشخیص پروتئین
  • آشنایی با نحوه کار و عملکرد تکنیک فلوسایتومتری
  • آشنایی با قسمت های مختلف دستگاه فلوسایتومتری

در تکنیک های وسترن بلات، PCR،Real time همان طور که ذکر شد، نیازمند دسترسی به کل محتوای ژنتیکی سلول و یا محتوای پروتئینی هستیم. بنابراین باید غشای سلول تخریب شود و در نتیجه ما خود سلول را دیگر نخواهیم داشت. اما برخی از تکنیک های شناسایی پروتئین وجود دارند که بدون از بین رفتن غشای سلول می توانند در تشخیص سلول محقق را یاری کنند. از جمله این تکنیک ها که قرار است در این طرح و طرح های آتی از آنها یاد شود می توان به فلوسایتومتری و ایمونوفلورسنت اشاره نمود.

تکنیک فلوسایتومتری، تکنیکی است که سلول ها را به طور سوسپانسیون(نه چسبنده) مورد آنالیز قرار می دهد. در حقیقت شرط اصلی در کار با این تکنیک این است که سلول ها حتماً به صورت سوسپانسیون باشند. بنابراین نمونه هایی که به صورت بافت هستند اگر نیاز به بررسی با فلوسایتومتری دارند باید حتماً به صورت سوسپانسیون در آورده شوند.

دستگاه های فلوسایتومتر از 3 بخش اصلی تشکیل شده اند که شامل:

سیستم پدید آورنده ی جریان (Fluidics System)،
سیستم نوری (Optical System) و
سیستم الکترونیک و پردازش (Electronics Systems) می باشد.

هر کدام از این بخش ها دارای، وظیفه ی معینی هستند و در اصل برای مفهوم راحت تر به سه بخش دسته بندی می شوند.

سیستم پدید آورنده جریان:

همان طور که در بالا به آن اشاره شد شرط اول در کار با این تکنیک سوسپانسیون بودن سلول های مورد بررسی می باشد. در کل سلول های موجودات مختلف یا به صورت فشرده در یک بافت قرار دارند(مانند اکثر بافت های بدن) و یا خود در محیطی سوسپانسیون قرار دارند(مانند خون).

سلول های مورد بررسی اگر سلول های خونی باشند نیازی به digestion (هضم کردن آن ها وجود ندارد. اما اگر به غیر از این نوع بافت باشند ابتدا باید توسط آنزیم های مختلف و یا به صورت مکانیکی و یا حتی به هر دو صورت، بافت را هضم نمود تا بتوان از بافت فشرده شده، سوپ سلولی تهیه نمود. آنزیم های مختلفی جهت هضم بافت ها وجود دارد که بسته به نوع بافت،سختی آن، مواد تشکیل دهنده آن باید نوع مناسب آن انتخاب شود. البته شایان ذکر است این انتخاب نباید به گونه ای باشد که به خود سلول صدمه زده و سبب مرگ آن شود.

کار اصلی سیستم پدید آورنده جریان در فلوسایتومتری را با ذکر مثالی ادامه می دهیم. اگر شما نیز در مترو رفت و آمد کرده باشید متوجه شده اید که در چند متر آن طرف تر از شروع گیت ها، مردم به طور پراکنده و در هم و بر هم به سمت گیت ها در حال حرکت هستند.

فلوسایتومتری

در نزدیک ورودی گیت ها توسط محفظه هایی سعی شده است که این خیل عظیم جمعیت و به طور پراکنده، به صورت تک تک شده تا بتوانند کارت خود را زده و از گیت عبور کنند. کار این محفظه ها دقیقاً تبدیل یک جمعیت پراکنده به یک جمعیت تک تک است.

در دستگاه فلوسایتومتری نیز سلول ها در یک لوله مخصوص آزمایش ریخته می شوند و دستگاه توسط پمپی قوی آن ها را مکش می کند. چنین محفظه ای برای عبور تک تک سلول ها تعبیه شده است که از عبور چند تایی سلول ها از مقابل منبع نوری جلوگیری می کند. سیستم های مختلفی برای این عبور تک تک وجود دارد که یکی از معروف ترین آن ها "هیدروداینامیک فوکوسینگ" است.

  • زیست شناسیفلوسایتومتری یک
  • توضیح فیلم:

    سلول های به طور پراکنده در جریان مایعی به سمت پایین در حر کت هستند. همان طور که ملاحظه می کنید در نقطه ای به صورت تک تک شده و عبور می کنند.

    بنابراین دو شرط اصلی برای نمونه های که قرار است با تکنیک فلوسایتمتری بررسی شوند وجود دارند:

    1- سوسپانسیون بودن
    2- عبور تک تک از مقابل منبع نوری


    مرکز یادگیری سایت تبیان - تهیه: فاضل صحرانشین سامانی

    تنظیم: مریم فروزان کیا